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| 来源： | 发布时间： 2012-9-14 17:06:16 | 浏览： 1114 |
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a. pBAD载体:
特点; 该表达质粒含有araBAD(arabinose)操纵子的PBAD启动子和编码该启动子的
正负调控子基因araC，具有紧密调控功能和高水平表达外源蛋白质的原核细胞表达
载体。注意:
1. 当要扦入其他信号肽片段，改建此载体时，请不要利用该载体上的Nde1 EcoR1
BamH1 Kpn1和 Pst1位点，以免造成重组困难，因为前述内切酶在此载体上均有二个位点，最好使用只有一个酶切位点的Sac1和Hind111位点。同时记住，如在不含任何信号肽的PBAD表达质粒扦入信号肽，其非编码N-末端要包含核糖体结合位点(RBS)核苷酸序列。
2 在使用含Omp A分泌信号肽的PBAD表达质粒时，请应用Omp A分泌信号肽上的Sac1以及载体Hind111酶切位点，这些在载体序列上都是单个酶切位点。
本公司目前有含Omp A分泌信号肽和不含任何信号肽的二种PBAD表达质粒，其多克隆位点区域图谱如下:
a-1、含Omp A分泌信号肽的PBAD表达质粒多克隆区域
SD
PBAD….TACCCGTTTTTTTCC….GCTAGCAGGAGGAAACG ATG AAA AAG ACA GCT ATC GCG ATT GCA GTG GCA CTG GCT GGT
A M A E L
TTC GCT ACC GTA GCC ATG GCC GAG CTC GGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGCCTGCAGGCATCCAAGCTT
Nco1 Sac1 Kpn1 Smal1 BamH1 Pst1 Hind111
a-2、不含分泌信号肽的PBAD表达质粒多克隆区域
EcoR1 Kpn1 BamH1 Pst1
PBAD….TACCCGTTTTTTTGG….GCTAGCGAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGCCTGCAGGCATCCAAGCTT
Nhe1 Sac1 Smal 1 Hind111
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